分离胶应该灌多少
分离胶的灌装量主要根据实验需求、蛋白分子量大小以及实验条件来确定。以下是一些具体的建议:
一般配制量
1mm厚的玻璃板制胶,配制分离胶(下层胶)约5ml,缓缓注入玻板中,然后覆盖一水层,室温静置15~20分钟待胶凝固。
浓缩胶(上层胶)约2ml,最后插上1mm的梳子,室温静置20分钟。
血清分离胶使用量
使用加胶机将分离胶加入到试管中,加入量为0.8-1.2g每支试管。
分离胶的厚度要大于等于6mm,以确保血清和血块能够很好隔离。
根据蛋白分子量选择
蛋白分子量小的蛋白,通常胶浓度选大一些,反之亦然。
例如,对于分子量在10-250kDa之间的蛋白质,通常推荐使用10%-12%的分离胶。
对于分子量在5-100kDa之间的蛋白质,建议使用12%以上的分离胶。
预实验
如果实验之前无法准确判断胶浓度如何选择,可以先进行10%或12%的预实验,后续再根据实际情况优化实验条件。
建议
根据实验需求选择合适的分离胶浓度,以确保蛋白能够有效分离。
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