荧光曲线为什么乱

荧光曲线出现乱的原因可能有以下几点：

微量蒸发

微量蒸发会导致溶液浓度升高，从而表现为荧光强度的线性增加。这种蒸发可能是由于反应管密封不严实或反应管壁上形成冷凝水所致。

气泡产生和破裂

在PCR反应过程中，气泡的产生和破裂会干扰荧光信号，导致荧光曲线出现波动。特别是当气泡在加热过程中破裂时，可能会被软件误认为是扩增的拐点，从而影响扩增曲线的准确性。

仪器电压不稳

仪器电压的不稳定会导致光源波动，进而影响荧光信号的稳定性，产生荧光波动。

模板浓度问题

模板浓度过低可能导致扩增曲线不明显或无法检出。循环数太少也可能导致反应在达到峰值前就结束。此外，反应体系中某个成分失效也会影响扩增结果。

体系成分问题

体系成分加不全、漏加或错加也可能导致扩增曲线异常，例如扩增曲线骤降或不增反降。

基线设置不当

基线设置超过曲线正常CT值，会导致曲线呈现倒S形。这种情况下，需要调整基线设置，使其保持在整体曲线的同一水平线上。

消泡不彻底

反应体系混匀后如果没有彻底消泡，温度上升时气泡破裂会导致荧光强度骤减，影响扩增曲线的连贯性。