组织蛋白上样上多少
组织蛋白上样的量主要 取决于多种因素,包括蛋白表达量、分子量、抗体效价以及实验目的等。以下是一些具体的建议:
一般上样量
Western blot中,每孔上样总量通常在15-50ug之间,这个范围适用于大部分蛋白的检测。
组织一般取200mg,匀浆后蛋白常能得到几百ug,跑十块胶足够。
根据蛋白表达量和目的调整
如果蛋白表达量较高,可以使用DAB显色需要50-100μg,而使用ECL曝光的上样量则为20-40μg。
对于纯度较高的单一条带样品,10微克的上样量通常就足够了;如果是细胞裂解液这样的样品,上样量可以提高至30~80微克。
避免信号过强或过弱
Western Blot实验中,蛋白的上样量通常建议在20μg-30μg之间,这个量级能保证足够的蛋白量以获得清晰的条带,同时又不至于过多导致信号饱和或条带模糊。
如果蛋白量过多,可能导致信号过强、条带模糊,甚至可能出现条带堆积的现象;如果蛋白量过少,则可能导致信号弱,难以检测到目标蛋白。
特殊情况的调整
如果蛋白样品是未经纯化的,含有较多杂带,可能需要增加上样量以便检测到目标蛋白。
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