为什么老是调不齐内参

内参不齐的问题可能由多种因素导致，以下是一些常见的原因及相应的解决方法：

样品处理问题

样品浓度不一致：在蛋白定量时，未将所有样品稀释成一致的浓度。应重新定量，确保所有样品的浓度相同。

样品损伤或残留：如药物流产或人工流产后子宫内膜未完全恢复正常，导致内参不一致。

实验操作问题

上样量不一致：由于蛋白表达量不同或上样量控制不准确，导致内参条带不一致。

转膜效率不一致：转膜过程中，一抗、二抗与内参的结合效率可能不一致。

制胶问题：胶制备不好，如电流或电压过大，样品扩散，或蛋白表达量高导致曝光时间长。

内参选择问题

内参表达量不一致：选择的内参基因在不同样本中的表达量不一致，导致内参条带不齐。

内参条带过深：内参条带过深，导致条带间比较困难，建议更换内参。

其他因素

PCR内参不齐：可能由于样本质量不佳、PCR反应条件不适合、技术操作不当或存在抑制物质等原因。

解决建议

优化样品处理

确保所有样品在蛋白定量时稀释成一致浓度。

对于复杂样品，如子宫内膜样本，需确保样本的纯净性和完整性。

改进实验操作

精确控制上样量，确保每个样品的量一致。

改进转膜条件，确保转膜效率一致。

仔细检查胶的制备过程，确保电流、电压适中，样品分布均匀。

选择合适的内参

选择表达量稳定、分子量适中的内参基因。

如果内参条带过深，可尝试更换内参或调整曝光时间。

排除干扰因素

检查样品中是否存在抑制物质，如PCR抑制剂，并进行相应的处理。

确保实验环境干净，避免交叉污染。

通过以上方法，可以有效解决内参不齐的问题，提高实验的准确性和可靠性。